· πολυακρυλαμίδιοΤο πήκτωμα πρέπει με μονομερές ακρυλαμιδίου, υλικό εκκίνησης πολυμερισμού, καταλύτη και το δικαίωμα του μίγματος αλατιού και ρυθμιστικού διαλύματος μαζί.
· ακρυλαμίδιοκαι το BIS (Ν, Ν '- διπλό ακρυλαμίδιο του μεθυλενίου) είναι η μήτρα πηκτής μονομερούς.
· Η διεργασία πολυμεριστικού πολυμερισμού ξεκινά αμμωνίου. Η διατύπωση της κόλλας απαιτεί 10% διάλυμα υπερθειικού αμμωνίου που παρασκευάζεται σε νερό. Οι περισσότερες από τις πληροφορίες έδειξαν την ανάγκη για ενεργό χρήση. Ωστόσο, η λύση 10% μπορεί να τοποθετηθεί στα 4 ℃ για αρκετές εβδομάδες χωρίς σημαντική απώλεια δραστηριότητας. Δημιουργήστε έως και 10 ml και απορρίψτε όταν η κόλλα αποτυγχάνει να συγκεντρωθεί.
Συμβουλή: Το ποσοστό τουακρυλαμίδιοΣε κόλλα αλληλουχίας και κόλλα πρωτεΐνης δεν είναι η ίδια. Εάν χρησιμοποιείτε το Premade Acrylamide: Solution BIS, βεβαιωθείτε ότι έχετε πάρει το σωστό μπουκάλι.
· Το TEMED (Ν, Ν, Ν ', Ν'- τετραμεθυλ αιθυλενοδιαμίνη) είναι ένας καταλύτης, σε ένα καφέ μπουκάλι, τοποθετημένο στο ψυγείο. Προσθέστε λίγο πριν χύσετε κόλλα.
· Η ηλεκτροφόρηση πολυακρυλαμιδίου που χρησιμοποιείται γυαλί σε ηλεκτροφόρηση θα πρέπει να πλυθεί πριν και μετά από κάθε φορά. Μετά την ηλεκτροφόρηση, πλύνετε με μια μαλακή βούρτσα και πανί σε ζεστό σαπουνόνερο, ξεπλύνετε με αποσταγμένο νερό και στέκεστε για να στεγνώσετε.
· Η υγρασία και η σκόνη μπορούν να προκαλέσουν με κοίλο πολυμερές. Πριν από την ηλεκτροφόρηση, καθαρίστε την γυάλινη πλάκα με γυάλινο καθαριστικό και σκουπίστε το με μια μαλακή βούρτσα. Πλύνετε με αποσταγμένο νερό και στεγνώστε καλά με ένα χαρτί σκουπίστε. Το ξεπλύνετε με 70% αιθανόλη πριν το σκουπίδι με χαρτί βοηθά στον καθαρισμό και την επιτάχυνση της ξήρανσης. Προσθέστε δείγματα ακρυλαμιδίου διαδοχικά: BIS, νερό, ρυθμιστικό διάλυμα, υπερθειικό αμμώνιο, temed. Ανακινήστε καλά και ρίξτε αμέσως.
Δεν είναι απαραίτητο να αποφευχθεί το πολυακρυλαμίδιο πριν από τον πολυμερισμό. (Το ακρυλαμίδιο χρησιμοποιήθηκε για να τοποθετηθεί σε κενό για την απομάκρυνση των φυσαλίδων επειδή το οξυγόνο αναστέλλει τον πολυμερισμό.)
Οριζόντιες συμβουλές δείγματος σημείου κόλλας.
· Βάλτε ένα κομμάτι μαύρου χαρτιού στο κάτω κουτί, μαύρο φόντο για να φτιάξετε κάποια οπή δείγματος για να δείτε πιο καθαρά.
· Ρυθμίστε το ρυθμιστικό διάλυμα δεξαμενής κόλλας, ακριβώς πάνω από το κολλοειδές.
· Εάν η άκρη έχει ένα φως, ενεργοποιήστε τα φώτα, αφήστε το φως να λάμπει κολλοειδές. Σχεδιάστε το δείγμα στη πιπέτα.
· Χρήση της αυτόματης συσκευής πιπέτας.
· Σε 10-200 mu 1 υγρό σημείο μετακίνησης μπορεί να χρησιμοποιηθεί στα περισσότερα σημεία του δείγματος. Για πολύ μικρές οπές δείγματος (λιγότερο από 10μ1), η μακρά κεφαλή πιπέτας που χρησιμοποιείται για την κόλλα αλληλουχίας είναι πιο βολική.
· Η πιπίνα μόλις βυθισμένη στο δείγμα, εισπνέοντας αργά κινούμενο υγρό. Το δείγμα μπορεί να εμφανιστεί κολλώδες με γλυκερίνη και η ταχεία άντληση μπορεί να τραβήξει φυσαλίδες αέρα στην κεφαλή της πιπέτας.
· Τα δείγματα μετά την εισπνοή της κεφαλής του πιπέτου, θα μετακινήσουν την κεφαλή του υγρού απαλά στην άκρη του σωλήνα ή το σκούπισμα χαρτιού που πιπιλίζουν υγρή κεφαλή έξω από τα σταγονίδια. Προσέξτε να μην πιπιλίζετε το δείγμα.
Τοποθετήστε το δείγμα στην οπή του δείγματος
· Συσκευή Pipetting για να διατηρηθεί μια μικρή πίεση, να κάνει τα δείγματα ελαφρώς μετακινήστε την κεφαλή υπερχείλισης.
· Η κεφαλή του πιπέτου εισάγεται στο ρυθμιστικό, ελαφρώς υψηλότερο από τις οπές των σημείων, διατηρεί θετική πίεση. Η άκρη της πιπέτας μπορεί να εισαχθεί σε μια μικρή τρύπα.
· Αργά και σταθερά τα δείγματα έξω. Η άκρη της πιπέτας τοποθετείται πάνω από την οπή δείγματος σημείου και το δείγμα θα βυθιστεί στην οπή. Αφήστε το δείγμα νεροχύτη για να γεμίσει την οπή του δείγματος αντί να πιέσει.
· Μόλις η τελευταία πτώση του δείγματος με υγρή κεφαλή, το υγρό θα μετακινηθεί στο δεύτερο πόδι, σιγά -σιγά αυξάνει την κίνηση του υγρού, μετακινηθείτε έξω από το buffer
Πώς να κάνετε κάθετη δειγματοληψία κόλλας;
· Οι οπές δείγματος σημείου κάθετης κόλλας σχηματίζονται μεταξύ δύο τεμαχίων γυαλιού. Σε πολύ λεπτή κόλλα, η κεφαλή της πιπέτας δεν μπορεί καν να εισαχθεί ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες. Παρακολουθήστε τη γλυκερίνη! Βάλτε την κεφαλή της πιπέτας πάνω από την οπή του δείγματος και το δείγμα θα βυθιστεί στην τρύπα.
· Σημείο δείγματος πριν, φροντίστε να τοποθετήσετε το κατακόρυφο σημείο της οπής του δείγματος πηκτώματος πολυπροπυλενίου ακυλενίου ξεπλύνεται. Ξεπλύνετε το μη ακρυλαμίδιο και το νερό που μπορεί να εμφανιστεί στο κάτω μέρος της οπής του δείγματος. Το νερό μπορεί να κάνει την οπή του δείγματος σημαντικά μικρότερη. Χρησιμοποιήστε σύριγγα 25ml ή 50ml και βελόνα 18-gauge. Ρίξτε το ρυθμιστικό ηλεκτροφόρησης και ξεπλύνετε προσεκτικά την οπή του δείγματος.
· Μπορεί να είναι δύσκολο να δείτε την οπή του δείγματος, αλλά τα υπόλοιπα είναι εύκολο. Εάν υπάρχουν υπερβολικές οπές, το ρυθμιστικό δείγματος μπορεί να δοκιμαστεί με μπλε βρωμοφαινόλη.
Χρόνος δημοσίευσης: Μαρ-31-2023