Προφυλάξεις για την ηλεκτροφόρηση σε γέλη πολυακρυλαμιδίου

· πολυακρυλαμίδιοΤο πήκτωμα πρέπει να αποτελείται από μονομερές ακρυλαμιδίου, υλικό έναρξης πολυμερισμού, καταλύτη και το δικαίωμα του μείγματος άλατος και ρυθμιστικού διαλύματος μαζί.

· ακρυλαμίδιοκαι το BIS (N, N'-μεθυλενοδιπλό ακρυλαμίδιο) είναι η μονομερής μήτρα πηκτής.

· έναρξη της διαδικασίας πολυμερισμού της κόλλας με υπερθειικό αμμώνιο. Η σύνθεση της κόλλας απαιτεί διάλυμα υπερθειικού αμμωνίου 10% παρασκευασμένο σε νερό. Οι περισσότερες πληροφορίες υποδεικνύουν την ανάγκη για ενεργή χρήση. Ωστόσο, το διάλυμα 10% μπορεί να τοποθετηθεί στους 4℃ για αρκετές εβδομάδες χωρίς σημαντική απώλεια δραστικότητας. Συμπληρώστε έως τα 10 ml και απορρίψτε το όταν η κόλλα δεν συσσωματωθεί.

Συμβουλή: Το ποσοστό τωνακρυλαμίδιοΣτην αλληλούχιση, η κόλλα και η πρωτεϊνική κόλλα δεν είναι το ίδιο. Εάν χρησιμοποιείτε έτοιμο διάλυμα ακρυλαμιδίου:BIS, φροντίστε να προμηθευτείτε το σωστό μπουκάλι.

· Το TEMED (N, N, N', N'-τετραμεθυλαιθυλενοδιαμίνη) είναι ένας καταλύτης, σε καφέ μπουκάλι, τοποθετημένο στο ψυγείο. Προσθέστε το λίγο πριν ρίξετε την κόλλα.

· Ηλεκτροφόρηση πολυακρυλαμιδίου Το γυαλί που χρησιμοποιείται στην ηλεκτροφόρηση πρέπει να πλένεται πριν και μετά από κάθε φορά. Μετά την ηλεκτροφόρηση, πλύνετε με μια μαλακή βούρτσα και ένα πανί σε ζεστό σαπουνόνερο, ξεπλύνετε με απεσταγμένο νερό και αφήστε το να στεγνώσει.

· Το κοίλο πολυμερές μπορεί να προκαλέσει υγρασία και σκόνη. Πριν από την ηλεκτροφόρηση, καθαρίστε την γυάλινη πλάκα με καθαριστικό γυαλιού και σκουπίστε την με μια μαλακή βούρτσα. Πλύνετε με απεσταγμένο νερό και στεγνώστε την καλά με ένα χαρτομάντιλο. Το ξέπλυμα με αιθανόλη 70% πριν το σκούπισμα με χαρτί βοηθά στον καθαρισμό και στην επιτάχυνση του στεγνώματος. Προσθέστε δείγματα ακρυλαμιδίου διαδοχικά: BIS, νερό, ρυθμιστικό διάλυμα, υπερθειικό αμμώνιο, TEMED. Ανακινήστε καλά και ρίξτε αμέσως.

Δεν είναι απαραίτητο να απαερωθεί το πολυακρυλαμίδιο πριν από τον πολυμερισμό. (Το ακρυλαμίδιο τοποθετούνταν σε κενό αέρος για την απομάκρυνση φυσαλίδων επειδή το οξυγόνο αναστέλλει τον πολυμερισμό.)

Δείγμα άκρων οριζόντιας κόλλας.

· Βάλτε ένα κομμάτι μαύρο χαρτί στο κάτω κουτί, με μαύρο φόντο για να κάνετε κάποια τρύπα δείγματος για να βλέπετε πιο καθαρά.
· ρυθμιστικό διάλυμα γεμάτο με δεξαμενή κόλλας, ακριβώς πάνω από το κολλοειδές.
· αν η άκρη έχει φως, ανάψτε τα φώτα, αφήστε το κολλοειδές φως να λάμψει. Τραβήξτε το δείγμα στην πιπέτα.
· χρησιμοποιώντας αυτόματη συσκευή πιπέτας.
· σε 10-200 mu 1 σημείο κίνησης υγρού μπορεί να χρησιμοποιηθεί στα περισσότερα σημεία του δείγματος. Για πολύ μικρές οπές δείγματος (λιγότερο από 10μ1), η μακριά κεφαλή πιπέτας που χρησιμοποιείται για την κόλλα αλληλούχισης είναι πιο βολική.

· πιπέτα μόλις βυθισμένο στο δείγμα, εισπνέοντας αργά κινούμενο υγρό. Το δείγμα μπορεί να φαίνεται κολλώδες με γλυκερίνη και η γρήγορη άντληση μπορεί να τραβήξει φυσαλίδες αέρα στην κεφαλή της πιπέτας.

· Τα δείγματα μετά την εισπνοή της κεφαλής αναρρόφησης, θα μετακινήσουν απαλά την κεφαλή υγρού στην άκρη του σωλήνα ή το χαρτί σκουπίσματος θα αναρροφήσει την κεφαλή υγρού έξω από τα σταγονίδια. Προσέξτε να μην αναρροφήσετε το δείγμα.

Τοποθετήστε το δείγμα στην οπή δείγματος

· συσκευή πιπέτας για να διατηρείται μικρή πίεση, ώστε τα δείγματα να κινούνται ελαφρώς κατά την υπερχείλιση της κεφαλής υγρού.
· η κεφαλή πιπέτας που εισάγεται στο ρυθμιστικό διάλυμα, ελαφρώς ψηλότερα από τις οπές σημείου, διατηρεί θετική πίεση. Η άκρη της πιπέτας μπορεί να εισαχθεί σε μια μικρή οπή.
· αργά και σταθερά τα δείγματα προς τα έξω. Η άκρη της πιπέτας τοποθετείται πάνω από την σημειακή οπή του δείγματος και το δείγμα θα βυθιστεί στην οπή. Αφήστε το δείγμα να βυθιστεί για να γεμίσει την οπή του δείγματος αντί να πιέζετε προς τα μέσα.
· Μόλις η τελευταία σταγόνα δείγματος με την κεφαλή υγρού, το υγρό θα μετακινηθεί στο δεύτερο πόδι, σηκώστε αργά το υγρό και μετακινηθείτε έξω από το buffer

Πώς να κάνετε κάθετη δειγματοληψία κόλλας;

· κάθετες οπές δείγματος σημείου κόλλας που σχηματίζονται ανάμεσα σε δύο κομμάτια γυαλιού. Σε πολύ λεπτή κόλλα, η κεφαλή της πιπέτας δεν μπορεί καν να εισαχθεί ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες. Προσέξτε τη γλυκερίνη! Τοποθετήστε την κεφαλή της πιπέτας πάνω από την οπή του δείγματος και το δείγμα θα βυθιστεί στην οπή.
· Πριν από τη λήψη του δείγματος, βεβαιωθείτε ότι η κάθετη άκρη της οπής του δείγματος από πολυπροπυλένιο ακυλικής γέλης έχει ξεπλυθεί καλά. Ξεπλύνετε το μη πολυμερισμένο ακρυλαμίδιο και το νερό που μπορεί να εμφανιστεί στον πυθμένα της οπής του δείγματος. Το νερό μπορεί να μειώσει σημαντικά την οπή του δείγματος. Χρησιμοποιήστε μια σύριγγα 25 ml ή 50 ml και μια βελόνα 18 gauge. Ρίξτε το ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης και ξεπλύνετε προσεκτικά την οπή του δείγματος.
· μπορεί να είναι δύσκολο να δείτε την οπή του δείγματος, αλλά ταυτόχρονα, τα υπόλοιπα είναι εύκολα. Εάν υπάρχουν επιπλέον οπές, το ρυθμιστικό διάλυμα δείγματος μπορεί να ελεγχθεί με μπλε βρωμοφαινόλης.