Προφυλάξεις για ηλεκτροφόρηση γέλης πολυακρυλαμιδίου

· πολυακρυλαμίδιογέλη πρέπει από μονομερές ακρυλαμιδίου, υλικό έναρξης πολυμερισμού, καταλύτη, και το δικαίωμα μίγματος άλατος και ρυθμιστικού διαλύματος μαζί.

· ακρυλαμίδιοκαι BIS (Ν, Ν'-μεθυλενο διπλό ακρυλαμίδιο) είναι η μήτρα γέλης από τη μορφή μονομερούς.

· διαδικασία πολυμερισμού κόλλας έναρξης υπερθειικού αμμωνίου. Η σύνθεση της κόλλας απαιτεί διάλυμα υπερθειικού αμμωνίου 10% παρασκευασμένο σε νερό. Οι περισσότερες πληροφορίες έδειχναν την ανάγκη για ενεργή χρήση. Ωστόσο, το διάλυμα 10% μπορεί να τοποθετηθεί στους 4℃ για αρκετές εβδομάδες χωρίς σημαντική απώλεια δραστηριότητας. Συμπληρώστε μέχρι τα 10 ml και πετάξτε όταν η κόλλα δεν συσσωματωθεί.

Συμβουλή: Το ποσοστό τωνακρυλαμίδιοστην αλληλουχία κόλλα και πρωτεϊνική κόλλα δεν είναι το ίδιο. Εάν χρησιμοποιείτε προκατασκευασμένο διάλυμα ακρυλαμιδίου: BIS, φροντίστε να προμηθευτείτε τη σωστή φιάλη.

· Το TEMED (N, N, N', N'-τετραμεθυλαιθυλενοδιαμίνη) είναι ένας καταλύτης, σε καφέ φιάλη, τοποθετημένος στο ψυγείο. Προσθέστε λίγο πριν ρίξετε την κόλλα.

· Ηλεκτροφόρηση πολυακρυλαμιδίου Το χρησιμοποιημένο γυαλί στην ηλεκτροφόρηση πρέπει να πλένεται πριν και μετά από κάθε φορά. Μετά την ηλεκτροφόρηση, πλύνετε με μαλακή βούρτσα και πανί σε ζεστό σαπουνόνερο, ξεπλύνετε με απεσταγμένο νερό και αφήστε το να στεγνώσει.

· Η υγρασία και η σκόνη μπορεί να προκαλέσουν με το κοίλο πολυμερές. Πριν την ηλεκτροφόρηση, καθαρίστε τη γυάλινη πλάκα με καθαριστικό γυαλιού και σκουπίστε την με μια μαλακή βούρτσα. Πλένουμε με απεσταγμένο νερό και στεγνώνουμε καλά με χαρτομάντηλο. Το ξέπλυμα με αιθανόλη 70% πριν το σκούπισμα με χαρτί βοηθά στον καθαρισμό και στην επιτάχυνση του στεγνώματος. Προσθέστε δείγματα ακρυλαμιδίου διαδοχικά: BIS, νερό, ρυθμιστικό διάλυμα, υπερθειικό αμμώνιο, TEMED. Ανακινήστε καλά και ρίξτε αμέσως.

Δεν είναι απαραίτητο να απαερωθεί το πολυακρυλαμίδιο πριν από τον πολυμερισμό. (Το ακρυλαμίδιο τοποθετούνταν στο κενό για να αφαιρεθούν οι φυσαλίδες επειδή το οξυγόνο αναστέλλει τον πολυμερισμό.)

Συμβουλές δείγματος οριζόντιου σημείου κόλλας.

· Βάλτε ένα κομμάτι μαύρο χαρτί στο κάτω πλαίσιο, μαύρο φόντο για να κάνετε κάποια τρύπα δείγματος για να δείτε πιο καθαρά.
· ρυθμιστικό διάλυμα γεμάτο δοχείο κόλλας, ακριβώς πάνω από το κολλοειδές.
· Αν η άκρη έχει φως, ανάψτε τα φώτα, αφήστε το φως να λάμπει κολλοειδές. Τραβήξτε το δείγμα στην πιπέτα.
· χρήση αυτόματης συσκευής σιφώνισης.
· σε 10-200 mu 1 υγρό σημείο κίνησης μπορεί να χρησιμοποιηθεί στα περισσότερα σημεία του δείγματος. Για πολύ μικρές οπές δείγματος (λιγότερο από 10μ1), η μακριά κεφαλή πιπέτας που χρησιμοποιείται για την αλληλούχιση της κόλλας είναι πιο βολική.

· σιφώνιο που μόλις βυθίστηκε στο δείγμα, εισπνέοντας αργά κινούμενο υγρό. Το δείγμα μπορεί να φαίνεται κολλώδες με γλυκερίνη και η ταχεία άντληση μπορεί να τραβήξει φυσαλίδες αέρα στην κεφαλή της πιπέτας.

· Τα δείγματα αφού εισπνεύσουν την κεφαλή πιπέτας, θα μετακινήσουν απαλά την κεφαλή του υγρού στην άκρη του σωλήνα ή το χαρτί σκουπίσματος απορροφά την κεφαλή υγρού έξω από τα σταγονίδια. Προσέξτε να μην πιπιλίσετε το δείγμα.

Τοποθετήστε το δείγμα στην οπή δείγματος

· Συσκευή σιφώνιο για να διατηρείται λίγη πίεση, κάντε τα δείγματα να μετακινηθούν ελαφρώς την κεφαλή υγρού υπερχείλισης.
· η κεφαλή πιπέτας που έχει εισαχθεί στο buffer, ελαφρώς ψηλότερα από τις σημειακές οπές, διατηρεί θετική πίεση. Το άκρο της πιπέτας μπορεί να εισαχθεί σε μια μικρή οπή.
· αργά και σταθερά τα δείγματα έξω. Το άκρο της πιπέτας τοποθετείται πάνω από τη σημειακή οπή δείγματος και το δείγμα θα βυθιστεί στην οπή. Αφήστε το δείγμα να βυθιστεί για να γεμίσει την τρύπα του δείγματος αντί να πιέσετε προς τα μέσα.
· μόλις η τελευταία σταγόνα δείγματος με κεφαλή υγρού, το υγρό θα μετακινηθεί στο δεύτερο σκέλος, σηκώστε αργά το υγρό, μετακινηθείτε έξω από το buffer

Πώς να κάνετε κάθετη δειγματοληψία κόλλας;

· Κατακόρυφες οπές δείγματος σημείου κόλλας που σχηματίζονται ανάμεσα σε δύο κομμάτια γυαλιού. Σε πολύ λεπτή κόλλα, η κεφαλή της πιπέτας δεν μπορεί να εισαχθεί καν ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες. Προσέξτε τη γλυκερίνη! Τοποθετήστε την κεφαλή της πιπέτας πάνω από την οπή του δείγματος και το δείγμα θα βυθιστεί στην οπή.
· σημείο δείγμα πριν, φροντίστε να βάλετε το κάθετο σημείο της τρύπας δείγματος γέλης πολυπροπυλενίου ξεπλυθεί καθαρό. Ξεπλύνετε το μη πολυμερισμένο ακρυλαμίδιο και το νερό που μπορεί να εμφανιστεί στο κάτω μέρος της οπής δείγματος. Το νερό μπορεί να κάνει την τρύπα του δείγματος σημαντικά μικρότερη. Χρησιμοποιήστε μια σύριγγα 25 ml ή 50 ml και μια βελόνα 18 gauge. Ρίξτε το ρυθμιστικό διάλυμα ηλεκτροφόρησης και ξεπλύνετε προσεκτικά την οπή δείγματος.
· μπορεί να είναι δύσκολο να δείτε την τρύπα του δείγματος, αλλά ταυτόχρονα, τα υπόλοιπα είναι εύκολα. Εάν υπάρχουν υπερβολικές οπές, το ρυθμιστικό διάλυμα δείγματος μπορεί να ελεγχθεί με μπλε βρωμοφαινόλης.